那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下蛋白分離純化搞不定？請看這里！

“蛋白質(zhì)在組織或細(xì)胞中一般都是以復(fù)雜的混合物形式存在，每種類型的細(xì)胞都含有上千種不同的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)分離純化方法已成為目前的研究熱點(diǎn)之一，而蛋白質(zhì)的分離純化工作較為復(fù)雜，需要根據(jù)不同的蛋白質(zhì)制定出相應(yīng)的策略，采用不同的方法。”

Q:蛋白質(zhì)分離純化目的

A:設(shè)法增加制品純度或比活性，對純化的要**以合理的效率、速度、收率和純度，將需要蛋白質(zhì)從細(xì)胞的全部其他成分特別是不想要的雜蛋白中分離出來，同時(shí)仍保留有這種多肽的生物學(xué)活性和化學(xué)完整性。

蛋白質(zhì)分離純化方法有哪些？

沉淀法

1、 鹽析

實(shí)驗(yàn)原理：中和蛋白質(zhì)表面電荷并破壞水化膜。

蛋白質(zhì)易溶于水，因?yàn)槠浞肿拥?COOH -NH2和-OH都是親水基團(tuán)，這些基團(tuán)與極性水分子相互作用形成水化層，包圍于蛋白質(zhì)分子周圍形成1~100 nm大小的親水膠體，從而削弱了蛋白質(zhì)分子之間的作用力。當(dāng)大量鹽加到蛋白質(zhì)溶液中，高濃度的鹽離子(如硫酸銨的 SO42- 和NH4+)有很強(qiáng)的水化力，可奪取蛋白質(zhì)分子的水化層，使之"失水"，于是蛋白質(zhì)膠粒凝結(jié)并沉淀析出。

2、等電點(diǎn)沉淀法

實(shí)驗(yàn)原理：利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)溶解度*低而各種蛋白質(zhì)又具有不同等電點(diǎn)的特點(diǎn)進(jìn)行分離的方法。

在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)分子以兩性離子形式存在，其分子凈電荷為零(即正負(fù)電荷相等)，此時(shí)蛋白質(zhì)分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥，分子相互之間的作用力減弱，其顆粒極易碰撞、凝聚而產(chǎn)生沉淀，所以蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)，其溶解度*小，*易形成沉淀物。

注意點(diǎn)：不同的蛋白質(zhì)，具有不同的等電點(diǎn)。同一種蛋白質(zhì)在不同條件下，等電點(diǎn)不同。

3、有機(jī)溶劑沉淀法

實(shí)驗(yàn)原理：加入有機(jī)溶劑使水溶液的介電常數(shù)降低，因而增加了兩個(gè)相反電荷基團(tuán)之間的吸引力，促進(jìn)了蛋白質(zhì)分子的聚集和沉淀。

有機(jī)溶劑引起蛋白質(zhì)沉淀的另一種解釋認(rèn)為與鹽析相似，有機(jī)溶劑與蛋白質(zhì)爭奪水化水，致使蛋白質(zhì)脫除水化膜，而易于聚集形成沉淀。

影響因素：(1)有機(jī)溶劑的選擇 (2)溫度的控制 (3)pH值 (4)離子強(qiáng)度

用此法析出的沉淀一般比鹽析法易過濾或離心沉降，分離后的蛋白質(zhì)沉淀應(yīng)立即用水或者緩沖液溶解，以達(dá)到降低有機(jī)溶劑的濃度的目的。此法在血液制品的制備過程中較多使用。

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